The Embryo Toxicity Research of Manufacturing Water of Medical Device of in Vitro Fertilization Technology / 中国医疗器械杂志

Water is an important component in liquid medical device products for human assisted reproductive technology. Water traits, conductivity, microbial limits, total organic carbon, easy oxides, heavy metal content, bacterial endotoxin and other indicators have an important impact on sperm, egg and embryo development in vitro, so for such products, the quality of water control is extremely important. The production water for producing such products is generally prepared by MilliQ purification system. In this research, we used four different types of water to fabricate the IVF liquids. It included deionized reverse osmosis water, ultra purified water and ultra purified water without endotoxin or nucleic acid, and compared with tap water. The in vitro rat embryo test system was used to study the embryotoxicity of this four different culture liquid production waters. From the result, the group of the super purified water without endotoxin and nucleic acid has the best result of the embryo formation rate, the number of total cell number and the inner cell number. This study proved the importance of removing endotoxin and nucleic acid from the water used for the preparation of the liquid products for assisted reproduction, and provided the basis for the selection of water quality for the liquid products for assisted reproduction.

Growth and Differentiation Factor-9 Supplementation Affects Viability and Morphology of Preantral Follicles in Equine Ovarian Fragments During Short-term in vitro Culture

Abstract This study aimed to evaluate different concentrations of growth and differentiation factor-9 (GDF-9) on the development and maintenance of equine preantral follicle morphology during short-term in vitro culture. Ovaries (n=5) from five mares were collected from a local slaughterhouse and transported to the laboratory, where nine fragments (5x5x1mm) were procured from each ovary. One fragment from each was immediately fixed and submitted for histological analysis (control group; D0). The other eight fragments were cultured in situ for two (D2) or six (D6) days in MEM+ or MEM+ supplemented with GDF-9 at different concentrations (i.e., 50, 100 and 200 ng/mL the GDF-9). After culturing with different concentrations of GDF-9 for 2 or 6 days, the fragments were processed for histological analysis. After two days of cultivation, we observed an increase in the percentage of developing follicles for 0 (MEM+), 50, 100 and 200 ng/mL GDF-9 compared to control (D0; P<0.05). When we evaluated all treatments that preserved follicular integrity, the GDF-9 concentration of 100 ng/mL presented results superior to those of the other cultures (P<0.05). While, at six days of culture, the concentration of 200 ng/mL of GDF-9 appeared to be more efficient in providing development compared to MEM+ (P<0.05). The percentage of morphologically intact follicles in the 6 days culture samples treated with 50 ng/mL of GDF-9 indicated that this concentration was effective in maintaining the integrity of the follicle (P<0.05). We conclude, therefore, that graduated GDF-9 addition to the medium ensure follicular development and is sufficient maintain the architecture.

Influencia de la subespecie de la donadora en la cantidad deembriones totales obtenidos in vitro: estudio retrospectivo / Influence of the subespecie of the donator cow in the quantity oftotal embryos obtained in vitro: a retrospective study / Influência da subespécie da vaca doadora na quantidade de embriões totais obtidos in vitro: estudo retrospectivo

A partir de los registros de transferencia de embriones producidos in vitro de tantos años de la central genética en el municipio de San Pedro de los Milagros Antioquia – Colombia, se buscó retrospectivamente si existía unarelación sobre la cantidad de ovocitos y embriones viables producidos por las donadoras. Dependiendo de la raza,se buscó determinar si existe una influencia de la donante. Las variables analizadas fueron: el toro, la raza, el lote, la historia reproductiva de las donadoras, las cuales se encontraban en iguales condiciones de manejo, tanto sanitarias y nutricionales. La evaluación de los resultados se realizó mediante el modelo estadístico de Chi-cuadrado.Para la comparación entre el porcentaje de ovocitos viables y el porcentaje de embriones producidos se realizó unaprueba de análisis de varianza (ANOVA) y una prueba de Fisher con un intervalo de confianza del 95% y un valorde p>0.05. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la producción de embriones (40% vs 29%), taurus e indicus, respectivamente. Se concluye, que las donadoras taurus producen mayor número de embrionesque las indicus.

From the many years of transfer records of embryos produced in vitro at the genetics center in the municipality ofSan Pedro de los Milagros, Antioquia, Colombia, we examined retrospectively if there was a relationship betweenthe number of viable oocytes and embryos produced by the donors. Depending on the race, we sought to determine whether there is an influence by the donor. The variables analyzed were: the bull, race, batch, and reproductive history of the donors, all of which were in similar health and nutritional conditions. The evaluation of the results was carried out with the Chi- Square test statistical model. In order to compare between the percentage of viable oocytes and the percentage of embryos, an analysis of variance (ANOVA) was performed as well as a Fischer test, with a confidence interval of 95% and a p-value of p>0.05. Statistically significant differences were found in the production of embryos (40% vs 29%) taurus and indicus, respectively. The conclusion is that taurus donors produce greater numbers of embryos than indicus donors.

A partir dos registros de transferência de embriões produzidos in vitro nos muitos anos da central genética nomunicípio de San Pedro de los Milagros, Antioquia- Colômbia procuramos retrospectivamente se há uma relaçãoentre a quantidade do número de oócitos viáveis e embriões produzidos por doadores. Dependendo da raça,buscou-se determinar se há uma influência do doador. As variáveis analisadas foram: o touro, a raça, o lote, a história reprodutiva dos doadores, os quais encontravam-se nas mesmas condições de manejo, saúde e nutrição. A avaliação dos resultados foi realizada utilizando o modelo de teste estatístico Chi-quadrado. Para a comparação entrea porcentagem de oócitos viáveis e a porcentagem de embriões produzidos foram realizados um teste pela análisede variância (ANOVA) e um teste de Fisher, com intervalo de confiança de 95% e um valor de p>0.05. Foramencontradas diferenças estatisticamente significativas na produção de embriões (40% vs 29%), taurus e indicus,respectivamente. A conclusão é que os doadores taurus produzem um número maior de embriões que os doadoresindicus.

Consideraciones importantes acerca de la producción in vitro de embriones equinos / Important considerations about in vitroproduction of equine embryos / Considerações importantes sobre a produção in vitro de embriões eqüinos

La producción in vitro de embriones (PIVE) en equinos es una técnica que genera incrementos en la eficienciareproductiva de especímenes de alto valor genético y comercial. A pesar de todos los estudios que se hanrealizado, la PIVE es una técnica con acceso y un éxito limitado, debido principalmente a las dificultades paraalcanzar tasas de fertilización eficientes mediante fertilización in vitro convencional, al igual que por las altasnecesidades en recursos técnicos y económicos para la fertilización mediante inyección intracitoplasmáticade espermatozoides (ICSI), entre otras limitaciones existentes para el desarrollo embrionario in vitro. En elmundo, se han evaluado múltiples alternativas para el mejoramiento de la PIVE en equinos, desde el uso dediferentes medios, fluidos, células, y moléculas, hasta la utilización de métodos alternativos para mejorar lastasas de fertilización como la ICSI en asociación de sustancias como el polivinilalcohol. Esta revisión exploralos avances investigativos y las expectativas futuras de aplicación de la técnica de PIVE en equinos.

The in vitro embryo production (PIVE) in horses is a technique that generates increases in reproductive efficiencyof high genetic and commercial value animals. Despite all the studies that has been made, PIVE is still atechnique with limited access and success, mainly due to difficulties to achieve efficient rates of fertilizationthrough conventional in vitro fertilization, as well as by the high needs in technical and economic resources for fertilization using intracytoplasmic sperm injection (ICSI), among other limitations on in vitro embryonic development. In the world there have been evaluated multiple alternatives for improving the PIVE in horses: from the use of different means, fluids, cells and molecules, to the use of alternative methods to improve therates of fertilization through ICSI with the use of substances such as polyvinylalcohol. This review explores the research progress and future expectations for the application of the PIVE technique in horses.

A produção de embriões eqüinos in vitro (PIVE) é uma técnica que aumenta eficiência reprodutiva em espéciesde alto valor genético e comercial. Apesar de todos os estudos realizados, a PIVE é uma técnica de acesso eêxito limitados, principalmente devido à dificuldade de se alcançar taxas de fertilização eficientes diante dafertilização in vitro convencional, grande necessidade de recursos financeiros e técnicos para a fertilizaçãopor injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI), entre outras limitações para o desenvolvimentoembrionário in vitro. Em todo mundo foram avaliadas várias alternativas para a melhoria da PIVE em eqüinos,desde a utilização de diferentes meios, fluidos, células e moléculas até a utilização de métodos alternativos paramelhorar as taxas de fertilização como a ICSI em associação com outras substâncias como o álcool polivinílico.Essa revisão aborda o progresso da pesquisa e as perspectivas futuras de aplicação da técnica PIVE em eqüinos.

Influence of climatic conditions on in vitro production of bovine embryos / Influência do clima na produção in vitro de embriões bovinos

Temperature and rainfall were analyzed daily during six years to evaluate their influence on in vitro production of bovine embryos. Weekly replications (n=480) were performed on 14,778 ovaries collected at slaughterhouses. Cumulus oocyte complexes (n=19,180) were fertilized with a pool of Bos taurus taurus semen in one incubator with 5 percent CO2. Presumable zygotes were cultured in gasified plastic bags with 5 percent CO2, 5 percent O2, and 90 percent N2. In the first year, cleavage and embryo yield were 60.3 percent and 15.6 percent, respectively, being lower (P<0.05) than in the following years. Average cleavage rates were always lower in winter (P<0.0001), thus producing less embryos. Winter climatic conditions had a negative influence on in vitro production, when cleavage and embryo yield declined, possibly because of reduced availability and growth of native pasture.

A temperatura e a precipitação pluviométrica foram analisadas diariamente, durante seis anos, para avaliar sua influência sobre a produção in vitro de embriões bovinos. As repetições semanais (n=480) foram realizadas com 14.778 ovários coletados em matadouros. Os oócitos (n=19.180) foram maturados em estufa com atmosfera com controle de temperatura e umidade saturada com 5 por cento de CO2 e, após 20h, foram fecundados com sêmen de Bos taurus taurus e mantidos sob as mesmas condições de atmosfera da maturação. Os zigotos foram cultivados em placas de quatro poços em bolsas gaseificadas com 5 por cento de CO2, 5 por cento de O2 e 90 por cento de N2, à temperatura de 39ºC e umidade saturada. No primeiro ano, a taxa clivagem (60,3 por cento) e a produção de embriões (15,6 por cento) foram inferiores (P<0,05) aos demais anos. As taxas de clivagem foram sempre menores no inverno (P<0,0001). As condições climáticas no inverno tiveram influência negativa sobre a produção in vitro de embriões bovinos e houve diminuição nos índices de clivagem e produção de blastocistos, possivelmente devido à reduzida disponibilidade e crescimento da pastagem nativa.

Pioovario como complicación de aspiración folicular por vía transvaginal / Pyoovary as a complication of transvaginal folliculara aspiration

Paciente con esterilidad primaria; antecedente de cirugía tubaria y factor tuboperitoneal irreversiblemente dañado; se le programó para fertilización in vitro con transferencia de embriones. Había sido sometida a hiperestimulación ovárica con FSH pura y menotropinas. Se le practicó aspiración folicular vía vagina con guía ultrasonográfica. Siete días después presentó dolor tipo cólico en fosa iliaca izquierda. Se encontró una masa dura, dolorosa, en fosa iliaca izquierda. Utero desplazado a la derecha, doloroso a la movilización; fondo de saco vaginal izquierdo abombado y tumoración anexial izquierda, no delimitada; tumoración pararrectal izquierda. Se practicó laparotomía exploradora con drenaje de absceso pélvico, 10 a 12 cm. y ooforectomía izquierda; diagnóstico de pioovario izquierdo. Evolución satisfactoria

Reproducción asistida: alternativas / Assited reproduction: alternatives

A partir de las primeras publicaciones sobre fertilización in vitro (FIV-TE), Patrick Steptoe y Robert Edwards aportaron una serie de conocimientos y nuevos conceptos en la Ginecología Moderna, dando origen a una nueva era en la Medicina Reproductiva, ideándose así, una serie de programas y metodologías para emular el ciclo ovárico fisiológico; de este concepto, Ricardo Asch conlleva la transferencia de gamentos o trompas denominando a este procedimiento GIFT. A estas metodologías, de alta tecnología se les ha denominado "Reproducción Asistida", misma que es revisada en este trabajo.

Incubadora alternativa para fertilizaçäo in vitro / Alternative incubator for in vitro fertilization

Com o alto custo das incubadoras utilizadas para fertilizaçäo in vitro, desenvolvemos uma incubadora alternativa a partir de uma estufa Fanen modelo 002CB, trabalhando em sistema fechado, com mistura gasosa pronta fornecida pela White-Martins. A mistura gasosa com 5 por cento de CO2, 20 por cento de O2 e balanceada con N2, circula através de filtro é aquecido e umedecido sendo retido em dissecadores. Os resultados foram aferidos e comparados por fertilizaçäo in vitro de oócitos bovinos e acompanhados por 48 horas após fertilizaçäo havendo desenvolvimento embrionário até mórula. Os resultados comparados com mesma cultura em incubadora Forma Scientific (Los Angeles, USA) revelou resultados ligeiramente superiores da incubadora alternativa